海藻糖酶(TREH)真核蛋白操作步驟

海藻糖酶(TREH)真核蛋白操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

細(xì)胞數(shù)量

Lysis Buffer加入量

107個(gè)

0.5 mL～1 mL

5×106個(gè)

0.2 mL～0.5 mL

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融

硅膠膜DNA離心吸附柱（大提）收集管（見(jiàn)關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

硅膠膜離心吸附柱（小提）收集器（見(jiàn)關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

硅膠膜離心吸附柱系列（15層膜，小提）

硅膠膜離心吸附柱再生液

生物磁珠2：殼聚糖磁珠

生物磁珠2：巰基磁珠（停產(chǎn)）

生物磁珠2：醛基磁珠（停產(chǎn)）

生物磁珠2：無(wú)包被磁珠

生物磁珠：氨基磁珠

生物磁珠：硅基磁珠

生物磁珠：環(huán)氧基磁珠

生物磁珠：羧基磁珠

酸洗玻璃珠系列

微量單鏈DNA定量試劑盒核酸電泳套裝

一站式DNA非變性PAGE電泳套裝

一站式DNA尿素-PAGE電泳套裝

一站式miRNA尿素-PAGE電泳套裝

一站式RNA電泳套裝

核酸電泳液

50×TAE電泳液（2500 mL)

RNA電泳液，10×（100 mL）

RNA電泳液，10×（250 mL）

TBE Running Buffer（TBE電泳液，10×）

超快核酸電泳液（干粉）（20 L）

超快核酸電泳液（干粉）（50 L）

核酸電泳液：50×TAE電泳液（250 mL)