栀子LAMP鉴定试剂盒使用方法

栀子LAMP鉴定试剂盒使用方法：

一、样品采集：

1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验要求进行。

2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。

3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。

4、病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。

一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）

1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA段作为阳性对照。

2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。

4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。 

二、DNA提取：

可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购上海泽叶生物科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。

1、液体培养物：取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中，8000rpm离心3min，尽量吸弃上清，加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。

2、固体培养物：挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。

3、粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。

4、其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。

注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议在样品制备区域加入阳性对照。 

API5凋亡抑制因子5抗体

AQP3水通道蛋白-3抗体

APOD载脂蛋白D抗体

AIFM2线粒体凋亡诱导因子2抗体

ABL2ABL2蛋白抗体

ACE血管紧张素转换酶ACE1抗体

ACE2血管紧张素转换酶2抗体

AcinusAcinus抗体

Ack1醋酸激酶1抗体

ACTH 促肾上腺皮质激素抗体

ACTH 促肾上腺皮质激素ACTH抗体

ACTH 促肾上腺皮质激素ACTH 抗体

ADNP活性依赖的神经保护肽抗体

Alpha 1 Acid Glycoproteinα1酸性糖蛋白1/类粘蛋白1抗体

Alpha 1 acid glycoprotein 2α1酸性糖蛋白2抗体

phospho-AQP2磷酸化水通道蛋白2抗体

Vasopressin抗利尿激素/血管升压素/加压素/血管加压素抗体

ABCF1ATP结合盒蛋白家族GCN20F家族1抗体

AKR1B1醛糖还原酶抗体

Serum albumin人血清白蛋白抗体