PCR擴增試劑盒的實驗注意事項介紹

　　PCR擴增試劑盒適用于常規(guī)的PCR反應(yīng)和一些結(jié)構(gòu)復雜的模板如GC含量高、有二級結(jié)構(gòu)等的PCR擴增，由于多種PCR增強劑和穩(wěn)定劑的發(fā)現(xiàn)，穩(wěn)定預(yù)配好的PCR混合液不僅簡化了操作程序、減少了污染、降低勞動強度和取樣誤差，而且增加了PCR反應(yīng)的特異性，降低了對PCR條件的要求，可擴增2個拷貝的目的模板，使實驗結(jié)果更加。該產(chǎn)品分為含染料和不含染料兩種體系，在PCR結(jié)束后可以直接電泳，無需再加入上樣緩沖液。

　　PCR擴增試劑盒實驗事項：

　　1.樣本上PCR平臺可做的樣本包括血液，唾液，口腔拭子，在實驗中，對于DNA投入量要求不是很高，根據(jù)不同項目需求，DNA投入量的范圍在100pg到100ng之間。

　　2.進行PCR反應(yīng)前，可以將所有g(shù)DNA的濃度稀釋到同一濃度，并轉(zhuǎn)移到PCR8聯(lián)管中，一方面是便于排槍操作，另一方面是加入相同起始量的gDNA，這樣可以降低終文庫的濃度差異，便于混合文庫。

　　3.大多數(shù)情況下引物是1管，操作相當方便；當目標區(qū)域是外顯子或者是其他連續(xù)區(qū)域時，把引物分裝為2管，需要第二輪PCR前把產(chǎn)物合并，再進行下一步反應(yīng)。

　　4.執(zhí)行多重PCR反應(yīng)時，特別是樣本量多的情況下，可以將T1設(shè)為一組，T2設(shè)為一組，便于制備反應(yīng)試劑混合液和排槍操作；并把解凍好的試劑放置在冰盒上，在冰盒上進行加樣操作。

　　5.實驗中，可以在PCR管壁上和管蓋上同時進行反應(yīng)編號標記，防止高溫或其他原因?qū)е掠浱栂?，避免后續(xù)產(chǎn)物混合操作失誤，造成樣本交叉污染。