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簡(jiǎn)要描述:脫氫酶(DHA)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:虎紅鈉鹽瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Rose Bengal Agar250克生物制品真菌、酵母菌計(jì)數(shù)沙氏瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Sabouraud′s Agar250克用于真菌檢測(cè)改良沙氏瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Sabouraud′s Agar,Modified250克真菌檢測(cè)沙氏液體進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Liquid Sabourand Medium250克真菌、酵母菌增菌培養(yǎng)
詳細(xì)介紹
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:脫氫酶(DHA)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測(cè)方法:可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6944
產(chǎn)品分類:其它系列
商品介紹:
測(cè)定意義: 脫氫酶(dehydrogenase, DHA) 是一類催化物質(zhì)氧化還原反應(yīng)的酶,催化底物通過(guò)細(xì)胞色素系統(tǒng)被氧化,釋放的能量供機(jī)體使用,是生物體取得能量的一種方式。 測(cè)定原理 在細(xì)胞呼吸過(guò)程中,氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脫氫酶作用下接受氫以后,被還原為三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈現(xiàn)紅色,于485nm測(cè)定其吸光值,即得脫氫酶活性。 自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品 天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、冰、蒸餾水、甲醇(不允許快遞,請(qǐng)用戶自備)。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
1%NaCl蔗糖 20支
2 ug pYES4NT/C pYES4NT/C 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
50次 M13噬菌體單鏈基因組DNAout
2 ug pET-24a(+) pET-24a(+) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
PBS緩沖液(PH7.4) PBS Solution 250g
1瓶 4647細(xì)胞株 4647 低溫運(yùn)輸和保存
1盒 無(wú)內(nèi)毒素槍頭,1 mL
24 T 一氧化氮合成測(cè)試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
250mL MES Buffer,1.0M,pH6.5 MES Buffer,1.0M,pH6.5 常溫保存
250ug lambda(λ) DNA(不含N6-甲基腺) Lambda DNA(λ DNA) -20℃保存
2 ug pQE-40 pQE-40 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
脫氫酶(DHA)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法IKBKE/IKKi 核因子κB抑制蛋白E抗體 規(guī)格: 0.1ml
DECR1 線粒體2,4-雙烯酰輔A還原1抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-c-Jun(Thr249) 磷酸化原基因c-Jun抗體 規(guī)格: 0.1mlphospho-G3BP1(Ser232) 磷酸化Ras GTP活化蛋白結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Paxillin 樁蛋白Paxillin抗體 規(guī)格: 0.1mlCECR6 貓眼綜合征染色體候選基因6抗體 規(guī)格: 0.2ml
REG1β/REG1 beta 胰島細(xì)胞再生因子β抗體 規(guī)格: 0.2mlASAM/ACAM 脂肪細(xì)胞特異性粘附分子抗體 規(guī)格: 0.1ml
CTRP1/G protein coupled receptor interacting protein 1 G蛋白偶聯(lián)受體相互作用蛋白1抗體(補(bǔ)體Clq TNF相關(guān)蛋白1) 規(guī)格: 0.2mlId1 DNA結(jié)合抑制因子1抗體 規(guī)格: 0.2ml
SLC27A1 鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlDR6/CD358 瘤細(xì)胞調(diào)亡素/瘤壞死因子受體死亡受體6抗體 規(guī)格: 0.2ml
PDZD6 PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK6蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Monkey IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗猴IgG 規(guī)格: 0.1ml
NCF/NCF4/p40phox 嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子4抗體 規(guī)格: 0.1mlCK I alpha/STK 絲/蘇蛋白質(zhì)激抗體Casein kinase Ⅰα(CKⅠα) 規(guī)格: 0.1ml
SIRT6 沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-ERK5(Ser496) 磷酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激5抗體 規(guī)格: 0.1ml
TSPAN2 四分子交聯(lián)體2抗體(四旋蛋白) 規(guī)格: 0.2mlMyelin PLP 髓磷酯髓鞘蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
JMJD2A/KDM4A/JHDM3A 組蛋白去甲基化JMJ2A抗體 規(guī)格: 0.2mlAlpha-Synuclein/Syn/SNCA 核突觸蛋白α抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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