螺旋體通用PCR檢測試劑盒說明書

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環(huán)擴增，擴增產物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

大車前苷 CAS 104777-68-6 *  規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial

迷迭香酸 CAS 20283-92-5 *  規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

表兒茶素沒食子酸酯 CAS 1257-08-5 *  規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

 CAS 517-44-2 *  規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

人參皂甙RE CAS 51542-56-4 *  規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

百蕊草素I CAS 40437-72-7 *  規(guī)格： HPLC≥98%；20mg/vial

莫諾甙 CAS 25406-64-8 *  規(guī)格： HPLC≥97%；20mg/vial

黃芩素 CAS 491-67-8 *  規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

紅花苷II CAS 55750-84-0 *  規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

木通皂甙 D CAS 39524-08-8 *  規(guī)格： HPLC≥98%，20mg/vial

潑松龍/潑松 CAS  *  規(guī)格： 0.25g

槲皮苷 CAS 522-12-3 *  規(guī)格： 20mg

重樓對照藥材 CAS  *  規(guī)格： 1g

基苯酞 CAS 551-08-6 *  規(guī)格： 20mg

素 CAS 63968-64-9 *  規(guī)格： 20mg

螺旋體通用PCR檢測試劑盒說明書TE-10(人食管細胞)人腎皮層上皮細胞*培養(yǎng)基

MV3(人色素瘤細胞)5×106cells/瓶×2

絲蛋白結合LIM蛋白1(FBLIM1)重組蛋白  Recombinant Filamin Binding LIM Protein 1 (FBLIM1)

熱帶假絲酵母 Candida tropicalisCOLO 205(人結腸細胞)

饑餓素-O-乙酰基轉移酶(GOAT)重組蛋白  Recombinant Ghrelin-O-Acyltransferase (GOAT)

人視網膜微血管內皮細胞*培養(yǎng)基100mL

大鼠冠狀動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL

C6(大鼠膠質瘤細胞)5×106cells/瓶×2

考馬斯亮藍G-250人少突膠質細胞

SD-39瓊脂/SD-39 Agar濾膜法大腸桿菌O157的分離培養(yǎng)250克國產/進口

普雷恩毛霉 Mucor prainii人肺大靜脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基

技術原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。