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簡(jiǎn)要描述:腺病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒廠家上海帛科生物相關(guān)產(chǎn)品:DL-丁香樹脂酚;DL-Syringar CAS 1177-14-6 * 規(guī)格: 10mg大黃酸;Rhein CAS 478-43-3 * 規(guī)格: 20mg次黃嘌呤;6-Hydroxypurine CAS 68-94-0 *
詳細(xì)介紹
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
腺病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒廠家 | Adenovirus(AV)PCR | BK-P8765 |
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
?
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
非洲防己堿;Columbamine CAS 3621-36-1 * 規(guī)格: 20mg
二氫醉椒苫素 ;dihydrometh CAS 19902-91-1 * 規(guī)格: 10mg
DL-丁香樹脂酚;DL-Syringar CAS 1177-14-6 * 規(guī)格: 10mg
大黃酸;Rhein CAS 478-43-3 * 規(guī)格: 20mg
次黃嘌呤;6-Hydroxypurine CAS 68-94-0 * 規(guī)格: 20mg
刺芒柄花素;Formonetin CAS 485-72-3 * 規(guī)格: 20mg
;Phenylacetic aci CAS 103-82-2 * 規(guī)格: 20mg
表兒茶素;L-Epicatechin CAS 490-46-0 * 規(guī)格: 20mg
磺胺噻唑;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 72-14-0 * 規(guī)格: 0.25g
解喹;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 99607-70-2 * 規(guī)格: 0.1g
草定;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 97886-45-8 * 規(guī)格: 0.1g
;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS * 規(guī)格: 0.1g
硝胺;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 99-30-9 * 規(guī)格: 0.1g
蕓苔素內(nèi)酯;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 72962-43-7 * 規(guī)格: 0.1g
吡丙;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 95737-68-1 * 規(guī)格: 0.1g
腺病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒廠家二氫尿嘧 114.1 Two hydrogen uracil*:504-07-4分子量: C4H6N2O2
4-芐-2-氯甲啡啉 225.71 4- -2- benzyl chloromethyl morpholine*:40987-25-5分子量: C12H16ClNO
乙酰丙酮鈷(II) 356.26 Cobalt (II)*:14024-48-7分子量: C15H21CoO6
3-氟-4-吡甲醛 125.1 3- -4- pyridine formaldehyde*:40273-47-0分子量: C6H4FNO
乙胺嘧 248.71 The*:58-14-0分子量: C12H13ClN4
硫代米氏酮 TMK 284.42分子量: C17H20N2S*:1226-46-6
4-氯吡氮氧物 129.55 4- chloride pyridine nitrogen oxide*:1121-76-2分子量: C5H4ClNO
3-甲-4-硝吡唑 127.1 3- methyl -4-*:5334-39-4分子量: C4H5N3O2
2,3-二氟溴 192.99 2,3- two fluorine bromine*:38573-88-5分子量: C6H3BrF2
間三聯(lián) 230.3 Between three*:33763分子量: C18H14
5-[4-(三氟甲)]-1H-四唑 214.15 5-[4- (three)]-1H- four*:2251-79-8分子量: C8H5F3N4
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
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