詳細介紹
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現,DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
牛皰疹病毒型PCR檢測試劑盒廠家 | Bovine Hepervirus 1 (BHV1)1PCR | BK-P8909 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環(huán)擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
毛萼結甲(95%) CAS * 規(guī)格: 20mg
葫蘆素D CAS 3877-86-9 * 規(guī)格: 10mg
山茱萸 CAS * 規(guī)格: 1g
異鼠李素-3-O—新橙皮苷 CAS * 規(guī)格: 10mg
千層紙素A CAS 480-11-5 * 規(guī)格: 20mg
木瓜對照藥材 CAS * 規(guī)格: 1g
3-O-沒食子酰粘酸 CAS * 規(guī)格: 10mg
6-姜酚 CAS 23513-14-6 * 規(guī)格: 20mg
桂醛 CAS 104-55-2 * 規(guī)格: 20mg
柯皂苷元(95%) CAS 467-55-0 * 規(guī)格: 20mg
3,4,5-三 CAS 1916-07-0 * 規(guī)格: 20mg
肥皂草素(UV98%) CAS 8047-15-2 * 規(guī)格: 20mg
京平苷酸 CAS 27741-01-1 * 規(guī)格: 20mg
1,5-O-二啡??鼘幩?CAS 30964-13-7? * 規(guī)格: 20mg
人參皂苷Rh1 CAS 63223-86-9 * 規(guī)格: 20mg
牛皰疹病毒型PCR檢測試劑盒廠家銀杏內酯A Ginkgo biloba A 408.39916分子量:C20H24O9*:15291-75-5
環(huán)吡司胺 Ciclopiroxolamine 268.35分子量: C14H24N2O3*:41621-49-2
啡啉 Morpholin 87.12分子量: C4H9NO*:110-91-8
5--2,2-二氟-1,3-并二噁唑 173.12 5- -2,2- two -1,3- fluorine amino benzene and two oxazole*:1544-85-0分子量: C7H5F2NO2
4-溴-4'-聯 359 4- -4'- iodide*:105946-82-5分子量: C12H8BrI
3-溴芐 215.05 3- bromide*:39115-96-3分子量: C7H7BrN2O
穿心蓮內酯 Andrographolide 350.4492分子量:C20H30O5*:5508-58-7
酚硫殺 Phenol sulfur 244.74分子量:C11H13ClO2S*:25319-90-8
四水合乙酸鈷 249.08 Four hydrated cobalt acetate*:6147-53-1分子量: C4H6CoO4·4H2O; Co(CH3COO)2
豬去氧膽 Hyodeoxycholic Acid 392.57分子量:C24H40O4*:83-49-8
吲唑 118.14 Indazole*:271-44-3分子量: C7H6N2
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