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簡(jiǎn)要描述:加利福利亞腦炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格上海帛科生物相關(guān)產(chǎn)品:NAC瓊脂培養(yǎng)基/NAC Agar Medium假單胞菌屬分離培養(yǎng)100克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae293T/胚腎細(xì)胞紫色鏈霉菌 Streptomyces violaceus三葉草瘤菌 Rhizobium trifolii小鼠胚胎成纖維細(xì)胞英文名稱:PA317
詳細(xì)介紹
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
加利福利亞腦炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格 | California Encephalitis VirusRTPCR | BK-P8947 |
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
人尿道上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基刺孢吸水鏈霉菌北京變種 Streptomyces hygrospinosus
大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum猴菌
NAC瓊脂培養(yǎng)基/NAC Agar Medium假單胞菌屬分離培養(yǎng)100克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae293T/胚腎細(xì)胞
紫色鏈霉菌 Streptomyces violaceus三葉草瘤菌 Rhizobium trifolii
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞英文名稱:PA317
大鼠腎系膜細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
MDA-MB-157(人腺細(xì)胞)葡萄球菌屬 Staphylococcus sp
桿菌屬 Lactobacillus sp.
非洲爪蟾胚胎細(xì)胞英文名稱:ACTE1
ECV-304(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
加利福利亞腦炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格二并噻吩砜 216.26 Two benzene and thiophene*:1016-05-3分子量: C12H8O2S
3-羥吡-N-氧物 111.1 3- hydroxy pyridine -N- oxide*:6602-28-4分子量: C5H5NO2
2-溴-3-氯三氟甲 259.45 2- -3- three f*:384-16-7分子量: C7H3BrClF3
1-(4-羥甲)咪唑 174.2 1- (4-)*:86718-08-3分子量: C10H10N2O
3,4-二氟溴 192.99 3,4- two fluorine bromine*:348-61-8分子量: C6H3BrF2
偶氮氯膦 Azo chloride C16H11ClN2NaO11PS2·3分子量:85561-96-2*:85561-96-2
乙溴吡 188.07 Ethyl bromide*:1906-79-2分子量: C7H10BrN
六氟 186.05 Six -*:392-56-3分子量: C6F6
過(guò)一硫酸氫鉀 614.74 Potassium monopersulfate*:分子量:2KHS05 · KHS04 · K 2S0
1-溴-3-乙 185.06 1- -3- ethyl benzene*:2725-82-8分子量: C8H9Br
氯磷二異丙酯 Two isopropyl chloride phosphate 200.6分子量: C6H14ClO3P*:2574-25-6
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