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簡(jiǎn)要描述:禽腎炎病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒廠家上海帛科生物相關(guān)產(chǎn)品:細(xì)菌篩選培養(yǎng)基/Bacterium Screening MediumBR100克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口正常人結(jié)腸組織細(xì)胞英文名稱:CCD-18Co產(chǎn)品名稱 規(guī)格: 規(guī)格 用途: 用途
詳細(xì)介紹
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
禽腎炎病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒廠家 | Avian Nephritis Virus(ANV)RTPCR | BK-P8821 |
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實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。( DNA高溫變性低溫復(fù)性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個(gè)循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,并逐步應(yīng)用于臨床。
細(xì)菌篩選培養(yǎng)基/Bacterium Screening MediumBR100克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
正常人結(jié)腸組織細(xì)胞英文名稱:CCD-18Co
產(chǎn)品名稱 規(guī)格: 規(guī)格 用途: 用途
三葉草瘤菌 Rhizobium trifolii青霉屬 Penicillium sp.
5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基/5% Dextrose Broth Medium藥品細(xì)菌培養(yǎng),滴眼劑金黃色葡萄球菌培養(yǎng)等250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
布氏瓊脂/Brucella Agar彎桿菌的抗生素敏感性試驗(yàn)和純化培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
TAT肉湯/胰蛋白胨大豆卵磷脂聚山梨酸酯瓊脂/胰酶大豆卵磷脂聚山梨酸酯瓊脂/胰酪胨大豆卵磷脂聚山梨酸酯瓊脂/TAT Broth化妝品和藥品中微生物檢測(cè)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
大鼠肝細(xì)胞英文名稱:BRL
Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit/Nc-細(xì)胞核-漿蛋白抽提試劑盒人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞
細(xì)菌總數(shù)顯色培養(yǎng)基/Total Genes Chromogenic Medium檢測(cè)細(xì)菌總數(shù),培養(yǎng)24小時(shí),細(xì)菌顯紅色250毫升國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
人支氣管上皮細(xì)胞英文名稱:BEAS-2B
禽腎炎病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒廠家磺酰 172.2 Benzenesulfonylhydrazine*:80-17-1分子量: C6H8N2O2S
4,7-二溴-2,1,3-并硒二唑 340.86 4,7- -2,1,3- two with benzene and selenium bromide*:63224-42-0分子量: C6H2Br2N2Se
2-羥乙 129.2 2- hydroxyethyl piperidine*:1484-84-0分子量: C7H15NO
2--5-溴-3-硝三氟甲 2- amino -5- -3- nitro three f*:157026-18-1分子量:
5-乙尿嘧 140.14 5- ethyl uracil*:4212-49-1分子量: C6H8N2O2
紫杉葉素 Taxol. 304.256分子量:C15H12O7*:480-18-2
環(huán)戊二二羰鐵二聚體 353.92 Two two cyclopentadienyl carbonyl iron dimer*:12154-95-9分子量: C14H10Fe2O4
五味子酯甲 A, a 536.56968分子量:C30H32O9*:58546-56-8
對(duì)四聯(lián) 306.41 P-quaterphenyl*:135-70-6分子量: C24H18
4,4'-二八氟聯(lián) 328.17 4,4'- two amino eight fluorine*:1038-66-0分子量: C12H4F8N2
三氯乙 Trichloroethylene 131.39分子量: C2HCl3*:28861
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