5637（人膀胱癌細(xì)胞）

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

培養(yǎng)：
1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺(tái)內(nèi)，固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個(gè)橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養(yǎng)皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。
4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進(jìn)行碾磨，同時(shí)不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。
5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。
6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計(jì)數(shù)。
7.將稀釋好的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。
實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：
1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。

CD84 AIMP2抗體
CD7 乙酰膽堿酶抗體
TNFRSF10D 5-氨基乙酰丙酸合酶1抗體
KLK13 防御素α1/3抗體
PIGR ABC膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體
PDGFRA 植物延長(zhǎng)蛋白
IL3RA A-Raf抗體
CTLA4 磷酸化A-Raf抗體
MSR1 紅細(xì)胞腺苷脫氨酶3抗體
CD14 雄激素結(jié)合蛋白抗體
HA 肝再生增強(qiáng)因子抗體
SERPING1 APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體
METTL1 甲胎蛋白單克隆抗體
SELE 甲胎蛋白單克隆抗體
CR2 ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白1抗體
CD55 芳香烴受體抗體
CD8A 吸引素抗體
ICAM3 腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體
CD3D 蛋白激酶B2
IL18R1 血管生成素2抗體
C1S 芳香化酶/細(xì)胞色素P450/雌激素合成酶抗體
VTN 腺苷A2A受體抗體
ECM1 蛋白激酶A錨定蛋白95抗體
TF 頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體
HA 去整合素樣金屬蛋白酶8抗體
HA 芳香乙酰胺脫乙?；笜拥鞍?抗體
GAG-P24 ACN9蛋白抗體
TNFRSF1A 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶抗體
ENG 腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體
IL1R2 腺苷酸激酶抗體
IL17RA α2巨球蛋白樣蛋白1抗體 α2ML1
APOH 細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白3抗體
CD40 肌動(dòng)蛋白α/α-SMA/α Actin抗體
CD36 ATP結(jié)合蛋白家族7抗體
KLK11 ASCL2蛋白抗體
CD97 磷酸化脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體
NTRK3 磷酸化活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體
HA 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

自噬相關(guān)蛋白4A抗體 IGFBP-4 ELISA Kit
載脂蛋白A4抗體 IGFBP-3 ELISA Kit
12脂氧合酶抗體 IGFBP2 ELISA Kit
血管緊張素III抗體 IGFBP-1 ELISA Kit
腺苷酸環(huán)化酶3抗體 IGFBP-3 ELISA Kit
血管動(dòng)蛋白抗體 IGFBP-2 ELISA Kit
腺病毒早期E1A蛋白抗體 IGFBP-1 ELISA Kit
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 IGF-2R ELISA Kit
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 IGF-2 ELISA Kit
磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體 IGF2BP2 ELISA Kit
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體 IGF-1 ELISA Kit
胞質(zhì)乙醛脫氫酶1抗體 IRS-2 ELISA Kit
ADP核糖基化樣因子ARL3抗體 IRS1 ELISA Kit
花生四烯酸15脂氧合酶1抗體 ISR-β ELISA Kit
乳腺癌增強(qiáng)蛋白2抗體 INSRA ELISA Kit
α1微球蛋白抗體 IGF-Ⅱ ELISA Kit
α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體 IGF-Ⅰ ELISA Kit
腺苷A2b受體/神經(jīng)生長(zhǎng)因子1受體抗體 Anti-Ins ELISA Kit
AMPK的相關(guān)蛋白激酶5抗體 IDE ELISA Kit
致瘤磷蛋白32相關(guān)蛋白1抗體 INS ELISA Kit
腺苷脫氨酶抗體 IAPP ELISA Kit
含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族4抗體 TAP ELISA Kit
ATRNL1蛋白抗體 Try-Ⅱ ELISA Kit
AFP4a蛋白抗體 trypsin ELISA Kit
鐵蛋白Fe65樣蛋白1抗體 CPAF ELISA Kit
鐵蛋白Fe65樣蛋白2抗體 HbCO ELISA Kit
β淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白2抗體 NO ELISA Kit
早老素穩(wěn)定因子樣蛋白/γ分泌酶組件蛋白APH1抗體 NOS ELISA Kit
磷酸化蛋白激酶AKT1抗體 NOS ELISA Kit
磷酸化蛋白激酶AKT1抗體 NO ELISA Kit
ASH1L蛋白抗體 FOLR1 ELISA Kit
α2C-AR腎上腺素能受體抗體 FOLR ELISA Kit
中心體蛋白AZI1抗體 FA ELISA Kit
5637(人膀胱癌細(xì)胞)α蛋白激酶3抗體 GSSG ELISA Kit
表皮型脂氧合酶3抗體 OxLDL ELISA Kit
錨蛋白重復(fù)域28抗體 Ox-HDL ELISA Kit
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。