幾丁質(zhì)酶測試盒微量法

商品介紹：

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測,7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招：

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

2 ug pGEM Ex1 pGEM Ex1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

抗生素檢定培養(yǎng)基6號（PH7.2-7.4）  500g

1瓶 EAC細(xì)胞株 EAC 低溫運(yùn)輸和保存

含225ml鹽緩沖液均質(zhì)袋 Phosphate Buffered Saline 10個(gè)/包

2000U T4 RNA 連接 2 （截短型 K227Q） T4 RNA Ligase 2(truncated K227Q) -20℃保存

250mL RIPA Buffer with EDTA & EGTA  RIPA Buffer with EDTA & EGTA  常溫保存

1mL 溶液,50mg/mL Dexamethasone DXM Solution -20℃避光保存

2 ug pPROEX HTc pPROEX HTc 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

醇發(fā)酵管  20支

2 ug pCAMBIA1405.1 pCAMBIA1405.1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

10%纖維二糖水溶液  5ml×10支

幾丁質(zhì)酶測試盒微量法phospho-TCF3/E47/E2A(Thr355)  磷酸化轉(zhuǎn)錄因子3抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-EGFR (Tyr1172)  磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

CACH3/CaV1.3  L型鈣通道蛋白a1亞型3抗體 規(guī)格: 0.2ml

MALT1  粘膜相關(guān)淋巴組織轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-human IgG F(ab')2/Cy5  Cy5標(biāo)記的兔抗人IgG F(ab')2  規(guī)格: 0.1ml

ABCA7  三磷酸苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2ml

GIRK1  G蛋白激活內(nèi)向鉀通道1抗體 規(guī)格: 0.1ml

gremlin  骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

CLCA4  鈣激活氯離子通道4抗體 規(guī)格: 0.1ml

BST2/CD317  骨髓基質(zhì)干細(xì)胞抗原2抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-Rb/p105-Rb(Ser780)  磷酸化成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤抑蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

ED-1  外胚層發(fā)育不良抗體 規(guī)格: 0.1ml