異檸檬酸裂解酶（ICL)測試盒微量法

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

商品介紹：

試劑組成和配制:

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

實驗結(jié)果判斷我有妙招：

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

2 ug pLOX-Ttag-iresTK pLOX-Ttag-iresTK 低溫運輸，-20℃保存

醛類中和劑管  9ml*20

1瓶 MA-891細(xì)胞株 MA-891 低溫運輸和保存

普通瓊脂 Nutrient Agar 250g

1mg 磷脂 A2 Phospholipase A2  4℃保存

25mL TBE Sample Buffer,6X  TBE Sample Buffer,6X  常溫保存

100次 包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝 Inclusion Body Protein Solubilization & Refolding Pack 常溫保存

2 ug pSUPER-basic pSUPER-basic 低溫運輸，-20℃保存

100mL 酸 Acidic Phenol 常溫避光保存

2 ug pCMV-TK-Luc + pCMV-TK-Luc + 低溫運輸，-20℃保存

素B（1萬單位） Polymyxin B 1萬單位*5支

異檸檬酸裂解酶（ICL)測試盒微量法Sclerostin  骨形態(tài)發(fā)生抑制蛋白SOST抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml

Cadherin 8  鈣粘附蛋白8抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-SHC (Tyr317)  磷酸化SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

SLC39A7  轉(zhuǎn)運蛋白家族39成員7抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse IgA  兔抗小鼠IgA抗體 規(guī)格: 0.2ml

TRPM8  “冷"蛋白TRPM8抗體 規(guī)格: 0.2mlCTGFL  結(jié)締組織生因子樣蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

PNMT  苯乙醇胺甲基轉(zhuǎn)移抗體 規(guī)格: 0.2mlSIRT7  沉默調(diào)節(jié)樣蛋白SirT7抗體 規(guī)格: 0.2ml

FRMD6  FRMD6蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlHNF4/TCF4/HNF4A  肝細(xì)胞核因子4α抗體 規(guī)格: 0.1ml

LATS2  瘤抑制基因LATS2抗體 規(guī)格: 0.2mlMouse Anti-human IgM/Gold  膠體金標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格: 2ml

Rabbit Anti-dog IgG/PE  PE標(biāo)記的兔抗狗IgG 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-pig IgG/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的兔抗豬IgG 規(guī)格: 0.1ml

Calmodulin/CaM I  鈣調(diào)節(jié)素抗體（鈣調(diào)蛋白/鈣調(diào)素） 規(guī)格: 0.1mlphospho-SIRT6(Ser338)  磷酸化沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白6抗體 規(guī)格: 0.1ml