二氫黃酮醇還原酶（DFR）測(cè)試盒微量法

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

一、肝素的配制：

市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。

肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集：

全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。

產(chǎn)品名稱(chēng)：二氫黃酮醇還原酶（DFR）測(cè)試盒微量法

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

檢測(cè)方法：微量法

產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6464

產(chǎn)品分類(lèi)：氧化與抗氧化系列
商品介紹：

所需的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)！

1、樣本制備

注意事項(xiàng)：

1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。

4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？

對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是（1）試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒(méi)有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

1瓶 HT-29（RFP）細(xì)胞株 HT-29（RFP） 低溫運(yùn)輸和保存

2 ug pYCPlac22-EGFP pYCPlac22-EGFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

10次 百萬(wàn)堿基級(jí)細(xì)菌(G-)DNAout  

2 ug pAAV-LacZ pAAV-LacZ 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆瓊脂（TSA-YE） Trypticase Soy-Yeast Extract Agar 250g

1瓶 293ET細(xì)胞株 293ET 低溫運(yùn)輸和保存

96支 200μLRNase-free黃吸頭(盒裝已滅菌帶芯)  常溫

24 T 醛縮測(cè)試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

250mL MES Buffer,0.2M,pH6.5   MES Buffer,0.2M,pH6.5   常溫保存

100mg P- 苯基 p-Nitrophenylphosphorylcholine（NPCC） -20℃保存

2 ug pLVX-Tet-3G pLVX-Tet-3G 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

二氫黃酮醇還原酶（DFR）測(cè)試盒微量法DAL1/EPB41L3  細(xì)胞骨架4.1蛋白家族DAL1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-p57 Kip2 (Thr310)  磷酸化周期蛋白依賴激抑制因子1C抗體 規(guī)格: 0.1ml

OLFM4  凋亡蛋白OLFM44抗體 規(guī)格: 0.2ml

SMC4  染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白4抗體 規(guī)格: 0.2ml

CCL25/TECK  胸表達(dá)趨化因子抗體 規(guī)格: 0.2ml

C1GALT1  N-乙酰半糖胺糖蛋白3、β-半糖轉(zhuǎn)移1抗體 規(guī)格: 0.2ml

RAMP1  受體活性修飾蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

CKLFH6/CMTM6  趨化素樣因子超家族成員6抗體 規(guī)格: 0.2ml

KLHL3  Kelch樣蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-GNA12(Ser68)  磷酸化鳥(niǎo)苷酸調(diào)節(jié)蛋白12抗體 規(guī)格: 0.1mlTOP2 alpha  DNA拓普西異構(gòu)ⅡA抗體 規(guī)格: 0.1ml

TRIM17/RNF16  環(huán)指蛋白16抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Chicken IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml

Contactin 3  腦源性免疫球蛋白超家族蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1mlDonkey Anti-human IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的驢抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml