NAD蘋果酸酶（NADME）測試盒微量法

實驗結果判斷我有妙招：

1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結果的閾值。

3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發(fā)生反應的物質要密封，并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數(shù)據!

商品介紹：

試劑組成和配制:

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

操作步驟：

1. 樣品的準備：

a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

1nmol EcoR I-Not I-BamH I接頭 EcoR I-Not I-BamH I Adaptors -20℃保存

2 ug pMXS-GL (2000 ng) pMXS-GL (2000 ng) 低溫運輸，-20℃保存

white培養(yǎng)基 White Medium 250g

500mL Gelatin Blocking Buffer in PBS with azide   Gelatin Blocking Buffer in PBS with azide   常溫保存

醋酸鉛培養(yǎng)基 Lead Acetate Medium 250g

5g 固綠 Fast Green FCF 室溫干燥保存

50T 副雞嗜血桿菌PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

100mg 5-溴-4-氯-3-  BCIP -20℃保存

2 ug pBlueScriptR PEX5L pBlueScriptR PEX5L 低溫運輸，-20℃保存

1.5mL 非RNA清除劑2.0 RNA Erasol 2.0 4℃保存

2 ug pET-9d pET-9d 低溫運輸，-20℃保存

NAD蘋果酸酶（NADME）測試盒微量法phospho-SHC(Tyr349)  磷酸化SH2結構域轉化蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Goat Anti-rat IgG/APC  APC標記的羊抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

DSU/MREG  MREG蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

RIP1  受體相互作用蛋白激1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Integrin alpha E/CD103  整合素αE抗體 規(guī)格: 0.1ml

E.coli DH-5 Alpha  DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

TCTP  翻譯控制瘤蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Sortilin/NTR3/Gp95  神經降壓素受體3抗體（糖蛋白95） 規(guī)格: 0.2ml

KLHL7  kelch樣蛋白7抗體 規(guī)格: 0.2ml

CCDC68/se57-1  卷曲螺旋結構域蛋白68抗體(皮膚T淋巴細胞相關抗原) 規(guī)格: 0.2ml

Prkg1/cGKI  cGMP依賴性蛋白激1抗體 規(guī)格: 0.1ml

ESYT2/FAM62B  延伸突觸蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml