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    當(dāng)前位置:首頁   >  產(chǎn)品中心  >  基因檢測PCR試劑盒  >  RNA/DNA提取試劑盒  >  2μg質(zhì)粒PET32a

    質(zhì)粒PET32a

    簡要描述:質(zhì)粒PET32a及公司相關(guān)產(chǎn)品粘液素II,英文名或英文縮寫:Mucin,級別:BR,200u/mg,規(guī)格:1公斤 組蛋白脫乙?;?(HDAC9)活性比色法定量檢測試劑盒20次
    姆沙伯 W NAWChromosorb W-NAW humaesistinELISAKit人抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
    L-谷酸,英文名或英文縮寫:H-Glu(OMe)-OMe.HC

    • 產(chǎn)品型號:2μg
    • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
    • 更新時間:2023-12-31
    • 訪  問  量:536

    詳細(xì)介紹

    PCR實驗步驟:
    取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
    兩相分離 1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,1530孵育23分鐘。412000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%
    RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530孵育10分鐘后,于412000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
    RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?/span>47000rpm離心5分鐘。
    RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
    溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。

    原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0E1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。產(chǎn)品僅用于科研
    特異性強
    PCR
    反應(yīng)的特異性決定因素為:
    引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
    堿基配對原則;
    Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
    靶基因的特異性與保守性。
    產(chǎn)品名稱:質(zhì)粒PET32a 
    產(chǎn)品規(guī)格: 2μg
    產(chǎn)品貨號:BK-P96381
    儲存條件:-20避光保存,避免反復(fù)凍融。
    運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。

    產(chǎn)品特點:
    高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增;
    高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
    操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
    高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
    產(chǎn)品特點:
    1.
    使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴增;
    2.
    反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個循環(huán)只需20多分鐘;
    3.
    抗干擾能力強,反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
    PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。

    特異性熒光標(biāo)記:
    TaqMan

    TaqMan
    探針的特性:
    15′端標(biāo)記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC
    23′端標(biāo)記有熒光淬滅基團 Quencher, Q
    3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, RQ分開,發(fā)熒光
    4Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
    相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量:
    內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細(xì)胞中的表達量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。

    實驗注意事項:
    1
    RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
    2
    )客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
    3
    )客戶盡量不要提供DNARNA樣品。
    4
    )樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
    實時熒光定量PCRquantitative real-time PCRqPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括絕對定量和相對定量)和定性分析。
    主要服務(wù):DNARNA的絕對定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
    主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
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