Bicine Buffer

PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。產(chǎn)品僅用于科研
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱：Bicine Buffer 
產(chǎn)品規(guī)格： 詳見(jiàn)說(shuō)明
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-P96651
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
◇高特異性：與其他病毒無(wú)交叉反應(yīng)，無(wú)非特異性擴(kuò)增；
◇高靈敏度：檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡(jiǎn)便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè)；
◇高通量：多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴(kuò)增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強(qiáng)，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對(duì)土壤、糞便、腫瘤和血液來(lái)源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測(cè)分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，zui后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

特異性熒光標(biāo)記：
TaqMan法
TaqMan探針的特性：
（1）5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ，無(wú)熒光， R與Q分開(kāi)，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對(duì)定量通過(guò)內(nèi)標(biāo)定量：
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括絕對(duì)定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的絕對(duì)定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
雙重酯酶染液20片/箱  HumanCaspase12,Casp-12ELISA試劑盒人胱天蛋白酶12(Casp-12)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
無(wú)水硫酸鈉(分析標(biāo)準(zhǔn)品,pestizides≤1 ppm) sulfate anhydrous質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,pestizides≤1 ppm  人活化凝血因子X(FXa)試劑盒 Human FXa ELISA kit  人凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

甲嘧磺隆(標(biāo)準(zhǔn)品)Sulfometuron-methyl質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品  RatCollagenaseIELISAKit大鼠膠原酶I(CollagenaseI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  小鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)試劑盒 Mouse Cytochrome-C,Cyt-C ELISA Kit

西草凈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%)Simetryne質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%  10摩爾AmmoniumAcetate分子生物級(jí)溶液100毫升  基孔肯雅病毒(CHIKV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>) 48T

喹禾靈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%)Quizalofop-ethyl質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%  MouseCoisolELISA試劑盒小鼠皮質(zhì)醇(Coisol)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  Humanserine/threonineproteinkinase,STKELISA試劑盒人絲氨酸/蘇氨酸蛋酸酶(STK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
?；秦i去氧膽酸鈉質(zhì)量規(guī)格：≥98%,美國(guó)進(jìn)口 taurohyodeoxycholate hydrate  CLIAKitforvaspin(MouseVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor)ELISAKit小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑規(guī)格：48T/96T  大鼠尾加壓素II(Urotensin II) ELISA試劑盒 96T/48T ELISA試劑盒 組裝/原裝

磺丁基-β-環(huán)糊精;磺丁基倍他環(huán)糊精鈉質(zhì)量規(guī)格：>99%,USPCaptisol( beta-Cyclodextrin, sulfobutyl ethers,  salts)  膜電位依賴性化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒20  人維生素H(VH)試劑盒 Human Vitamin H,VH ELISA Kit

纈氨霉素質(zhì)量規(guī)格：>95% (HPLC),進(jìn)分Valinomycin  GM-CSFAb人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子抗體規(guī)格：48T/96T  脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒 紫外分光光度法 25管/24樣

5-氯-1，3-二甲基吡唑 質(zhì)量規(guī)格：>98%，5-Chloro-1,3-dimethyl-1H-pyrazole  小鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒 ，英文名： Bid ELISA Kit  RatProgesteronereceptor,PROGRELISA試劑盒小鼠孕同受體(PROGR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Bicine BufferHISTOCHOICEMOUNTINGMEDIA封組織學(xué)級(jí)無(wú)色至微黃液體RTsigma  ELISAKitCO人皮質(zhì)同/腎上腺同規(guī)格：48T/96T