輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

商品介紹：

試劑組成和配制:

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

實驗結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細胞樣品的準(zhǔn)備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

AHA3    AHA3抗體（擬南芥）    

Phospho-ATP1A1 (Ser23)    磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體    

phospho-ASK1 (Ser83)    磷酸化細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體    

AADACL1    中性酯水解酶1抗體    

Astrocyte    人星形膠質(zhì)細胞抗體    

Aldolase A    醛縮酶A抗體    

Annexin VI    膜粘連蛋白6抗體    

beta-Amyloid(25-35)    β淀粉樣肽（25-35）抗體    

Angiotensin I    血管緊張素I抗體    

Adrenomedullin    腎上腺髓質(zhì)素抗體(N端20肽)    

Arfaptin 2    ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體    

AVPR2    加壓素受體2抗體    

ASC    凋亡相關(guān)斑點樣蛋白ASC抗體    

Afadin    絲狀肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體    

Antithrombin III     抗3抗體    

Serum albumin (3F4)    人血清白蛋白單克隆抗體    

CUB帶狀瘡疹透明區(qū)樣域蛋白1(CUZD1)重組蛋白    Recombinant CUB And Zona Pellucida Like Domains Protein 1 (CUZD1)    

C-型凝集素域家族11成員A(CLEC11A)重組蛋白    Recombinant C-Type Lectin Domain Family 11, Member A (CLEC11A)    

C-型凝集素域家族2成員C(CLEC2C)重組蛋白    Recombinant C-Type Lectin Domain Family 2, Member C (CLEC2C)    

Dermokine蛋白(DMKN)重組蛋白    Recombinant Dermokine (DMKN)    

Dickkopf相關(guān)蛋白2(DKK2)重組蛋白    Recombinant Dickkopf Related Protein 2 (DKK2)    

Discs大同源物關(guān)聯(lián)蛋白5(DLGAP5)重組蛋白    Recombinant Discs, Large Homolog Associated Protein 5 (DLGAP5)    

EGF樣域蛋白6(EGFL6)重組蛋白    Recombinant EGF Like Domain Protein, Multiple 6 (EGFL6)    

EGF樣域蛋白7(EGFL7)重組蛋白    Recombinant EGF Like Domain Protein, Multiple 7 (EGFL7)    

Enah/Vasp樣蛋白(EVL)重組蛋白    Recombinant Enah/Vasp Like Protein (EVL)    

FK506結(jié)合蛋白樣蛋白(FKBPL)重組蛋白    Recombinant FK506 Binding Protein Like Protein (FKBPL)    

輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法FMS樣Flt3)重組蛋白    Recombinant FMS Like Tyrosine Kinase 3 (Flt3)    

GATA結(jié)合蛋白3(GATA3)重組蛋白    Recombinant GATA Binding Protein 3 (GATA3)    

GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)重組蛋白    Recombinant GATA Binding Protein 4 (GATA4)    

G蛋白偶聯(lián)受體家族C5組成員A(GPRC5A)重組蛋白    Recombinant G Protein Coupled Receptor, Family C, Group 5, Member A (GPRC5A)    

HtrA肽酶1(HTRA1)重組蛋白    Recombinant HtrA Serine Peptidase 1 (HTRA1)    

HtrA4(HTRA4)重組蛋白    Recombinant HtrA Serine Peptidase 4 (HTRA4)