詳細介紹
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環(huán)擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
阿留申病病毒PCR檢測試劑盒說明書 | Aleutian Disease Virus(ADV)PCR | BK-P8780 |
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現,DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
Inclusion body Denature Reagent/包涵體蛋白溶解100ml國產
土曲霉 Aspergillus terreus瑞士桿菌 Lactobacillus helveticus
肺英文名稱:Lewis瘤
甘丙肽(GAL)重組蛋白英文名稱:Recombinant Galanin (GAL)
苜蓿中華瘤菌 Sinorhizobium meliloti
鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamnosus皮革正青霉 Eupenicillium alutaceum
挪威假絲酵母 Candida norvegensis地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis
對氨基苯甲酸培養(yǎng)基(真菌)/PABA培養(yǎng)基(真菌)/PABA Medium(Fungi)已經磺胺類及抗生素類藥物治療的患者血等標本培養(yǎng)250克國產/進口
大鼠腎上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮細胞木耳 Auricularia auricula
鏈霉菌 Streptomyces sp.佛羅里達側耳 Pleurotus florida
阿留申病病毒PCR檢測試劑盒說明書2-甲-5-乙吡 121.2 2- methyl -5- ethyl pyridine*:104-90-5分子量: C8H11N
去甲異波爾定 Norisoboldine 313.3511分子量:C18H19NO4*:23599-69-1
對硝甲 Para nitro toluene 137.14分子量: C7H7NO2*:99-99-0
10-羥癸 10- hydroxy decanoic acid 188.26分子量:C10H20O3*:1679-53-4
對溴叔丁 213.11 To Ding Jiben*:3972-65-4分子量: C10H13Br
泛影 Pan influence acid 613.91分子量:C11H9I3N2O4*:50978-11-5
毛異黃酮 Gross flavone 284.26分子量:C16H12O5*:20575-57-9
2,4-雙(氯甲)* 217.13 2,4- bis (CL) three methyl benzene*:1585-17-7分子量: C11H14Cl2
新銅試劑(2.9-二甲鄰非羅林) 208.26 The new copper reagent (2.9- two)*:484-11-7分子量: C14H12N2
3-羥三氟硼酸鉀 200.008 3- hydroxy phenyl three kbf4*:871231-45-7分子量: C6H5BF3O.K
間溴氟 175 Bromo fluorobenzene*:1073-06-9分子量: C6H4BrF
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