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    吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)測試盒微量法

    簡要描述:特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
    產(chǎn)品名稱:吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)測試盒微量法
    產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣
    檢測方法:微量法
    產(chǎn)品貨號:BK-01S6526
    產(chǎn)品分類:氨基酸代謝系列
    商品介紹:
    測定意義:
    脯是植物體內(nèi)適應(yīng)逆境脅迫的一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。高等植物中脯代謝因其初始底物不同,分為谷( Glu) 和鳥( Orn) 兩條合成途徑。吡咯啉-5-羧酸合成

    • 產(chǎn)品型號:
    • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
    • 更新時間:2023-12-27
    • 訪  問  量:588

    詳細(xì)介紹

    特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

    產(chǎn)品名稱:吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)測試盒微量法

    產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣

    檢測方法:微量法

    產(chǎn)品貨號:BK-01S6526

    產(chǎn)品分類:氨基酸代謝系列
    商品介紹:

    測定意義:

    脯是植物體內(nèi)適應(yīng)逆境脅迫的一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。高等植物中脯代謝因其初始底物不同,分為谷( Glu) 和鳥( Orn) 兩條合成途徑。吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CSΔ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase)是以谷為前體合成脯途徑的關(guān)鍵酶,對植物適應(yīng)逆境脅迫起關(guān)鍵作用。

    測定原理:

    吡咯啉-5-羧酸合成酶催化谷生成P5C過程中分解ATP生成ADP和無機(jī)磷,通過鉬酸銨比色法測定單位時間內(nèi)產(chǎn)生無機(jī)磷的量可確定P5CS活性。

    需自備的儀器和用品:

    可見外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

    所需的儀器和用品:

    可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

    四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

    建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

    樣本和試劑浪費(fèi)!

    1、樣本制備

    組織樣本:

    取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

    勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

    【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

     

    細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

    先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

    提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

    12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

    【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

    4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

    QQ截圖20220307153537.png 

    實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

    一、肝素的配制:

    市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

    肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

    二、血液樣本的收集:

    全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

    1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

    2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

    選擇抗凝的注意點(diǎn):

    ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

    ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

    ③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

    ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

    用于測定。

    2 ug pYES2-FLAG pYES2-FLAG 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

    50次 柱式真菌DNAout Column Fungal DNAOUT 常溫

    2 ug pE-SUMO pE-SUMO 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

     cycloheximide 11.25mg/支*5

    5g  B6 Vitamin B6 室溫保存

    50T 轉(zhuǎn)基因植物NPTⅡ基因PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存

    48 T 肝/肌糖元測試盒  Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

    50ML Magnesium Sulfate Solution(溶液),1M Magnesium Sulfate Solution,1M 常溫保存

    50次 T3體外轉(zhuǎn)錄試劑盒 T3 in vitro Transcription Kit -20℃保存

    2 ug pLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 pLVX-EF1α-DsRed-Monomer-C1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

    測定培養(yǎng)基 Folic Acid Assay Medium 250g

    吡咯啉5羧酸合成酶(P5CS)測試盒微量法Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1021)  磷酸化小板源性生因子受體-B抗體 規(guī)格: 0.1ml

    HER2 receptor(NT)  HER2受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

    CAGE1/CT3/CT95  瘤/睪抗原3抗體 規(guī)格: 0.2ml

    SOAT2/ACAT2  ?;D(zhuǎn)移2抗體 0.2ml

    Goat Anti-Bovine IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml

    KLHL20  Kelch樣蛋白20抗體 規(guī)格: 0.2ml

    GDNF  膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體 規(guī)格: 0.1ml

    Apg12  自噬相關(guān)蛋白12抗體 規(guī)格: 0.2ml

    IL-2  白介素2抗體(人) 規(guī)格: 0.2ml

    Phospho-EGFR (Thr678)  磷酸化表皮生因子受體抗體 規(guī)格: 0.1ml

    Rabbit anti-mouse Kappa light chain/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格: 0.1ml

    CAS/CSE1  細(xì)胞凋亡敏性基因抗體 規(guī)格: 0.1ml 

    注意事項(xiàng):

    1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

    2、對照管只需要做一管。

    3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

    4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?

    對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時間不夠,可以延長反應(yīng)時間(反應(yīng)時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

    若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

     


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